小鼠透明質(zhì)酸試劑盒的操作步驟是什么

發(fā)布時(shí)間： 2022-05-06　　點(diǎn)擊次數： 548次

　　小鼠透明質(zhì)酸試劑盒是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預先包被的抗體為檢測指標的單*抗體。檢測相抗體為多*抗體,經(jīng)生物素(biotin)標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過(guò)氧化物酶標記的親和素反應;經(jīng)過(guò)PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。

　　小鼠透明質(zhì)酸試劑盒的操作步驟:

　　1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。

　　2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個(gè)標準品和空白孔建議做復孔。每個(gè)樣品根據自己的數量來(lái)定,能使用復孔的盡量做復孔。

　　3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。

　　4.甩去孔內液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

　　5.每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

　　6.甩去孔內液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

　　7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。

　　8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

　　9.在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

　　小鼠透明質(zhì)酸試劑盒的結果判斷與分析:

　　1、儀器值:于波長(cháng)450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

　　2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的LTB4標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線(xiàn),樣品的LTB4含量可根據其OD值由標準曲線(xiàn)換算出相應的濃度,再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線(xiàn)的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實(shí)際濃度。

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