人生長(cháng)激素釋放因子 GH-RF ELISA試劑盒

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包被的方式

將抗原或抗體固定在過(guò)程成為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過(guò)程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結構上的疏水集團與固相載體表面的疏水集團間的作用力。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等影響。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水集團，故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相有較強的吸附力，其聯(lián)結多發(fā)生在Fc段上，抗體結合點(diǎn)暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也采用與抗體相似的方法包被。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區域時(shí)，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特意抗體作預包被，其后通過(guò)抗原抗體反應使抗原固相化。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于1/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如，在檢測抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合?？蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線(xiàn)照射（例如30W紫外燈，75cm照射12小時(shí)），以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì)，如聚賴(lài)氨酸、魚(yú)精蛋白等作預包被，也可提高核酸的結合力。也可用親和素生物素系統作間接包被，即用親和素先包被載體，然后加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固、已擴大應用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。

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