兔溶菌酶檢測試劑盒實(shí)驗操作小竅門(mén)

　　兔溶菌酶檢測試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛孕酮(P)水平。用純化的牛孕酮(P)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入孕酮(P)，再與HRP標記的孕酮(P)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的孕酮(P)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度（OD值），通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中牛孕酮(P)濃度。

　　兔溶菌酶檢測試劑盒實(shí)驗操作小竅門(mén)：

　　1、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。

　　2、合理安排檢測量，以免反應板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(cháng)。

　　3、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

　　4、要盡量做雙孔實(shí)驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。

　　5、樣品稀釋液應用加液器加注，并經(jīng)常校對其準確性。

　　6、為防止樣品蒸發(fā)，試驗時(shí)將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。

　　7、未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。辣根過(guò)氧化物酶標記抗人IgG工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過(guò)的辣根過(guò)氧化物酶標記抗人IgG工作液。

　　8、ELISA試劑盒實(shí)驗中，加樣后及時(shí)放人孵箱，標本較多時(shí)，要分批操作。按說(shuō)明步驟嚴格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長(cháng)，導致非特異性結合緊附于反應孔周?chē)?，難以清洗*。

　　9、剩余樣品及廢棄物應經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5、0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

　　10、人ELISA試劑盒洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

　　11、每次實(shí)驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時(shí)先用此孔調OD值至零。

　　12、手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后。應靜置15～30s，不要將一個(gè)酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。

　　13、對樣本的結果有疑問(wèn)時(shí)需要使用其他檢測方法進(jìn)行驗證。

　　14、沒(méi)有去離子水或雙蒸水時(shí)，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來(lái)水。

　　15、在使用微量加樣器時(shí)，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標準品溶液。

　　16、吸取液體時(shí)速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，人ELISA試劑盒吸取的量不夠準確。

　　17、吸取液體時(shí)要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。